Dinamik Hücre Kültürü Modelinde Doğal Bileşiklerin Kök Hücre Yaşlanması Üzerindeki Protektif Etkisi

Amaç: Bal uygulamasının dinamik hücre kültürü modelinde, Mezenkimal kökenli deri kök hücreleri (DKH) ve insan deri fibroblastları (HFF1) üzerindeki UV kaynaklı yaşlanmaya karşı koruyucu etkisini ve bu süreçte rol oynayan kök hücre, hücre döngüsü, stres, apoptoz ve HDM ilişkili genlerin ve Wnt sinyal ileti yolağı genlerinin rolünü araştırmaktır. Yöntem: Deri modellemesi yapmak amacıyla sağlıklı bireylerden deri biyopsileri alındı. Biyopsilerden elde edilen Mezenkimal kökenli DKH’leri, HFF1 ve keratinosit (HaCaT) hücre hatları ile birlikte biyoreaktör (Live Flow 2) aracılığıyla kültüre edilip %1 bal ile 48 saat ön işleme tabi tutuldu. Bal uygulamasının ardından HFF1 ve DKH’leri yaşlanmayı indüklemek için UV hasarına maruz bırakıldı. Balın hücrelerdeki UV hasarı kaynaklı yaşlanma karşıtı etkisi ve Wnt sinyal ileti yolağı ile ilişkisi RT-qPCR yöntemi kullanılarak incelendi. Bulgular: Öncesinde bal uygulanan DKH’sinde UV hasar sonrası, bal uygulanmayan gruba göre pluripotensi genleri Oct4 ve Sox2 ifadelerinde artış gözlenirken, hücre döngüsü genleri p16, p21 ve p53 gen ifadelerinde azalma gözlenmiştir. Bu süreçte bal uygulanan kök hücrede UV hasar sonrası Wnt3a ve Wnt5a ifadeleri artarken β-katenin ifadesinde azalma gözlendi. Bal ön uygulaması UV hasara karşı HFF1 hücrelerinde Hsp70 ve HAS2 ifadelerini arttırdı ve Kaspaz 8 ifadesini azalttı. UV hasar öncesi bal uygulanan HFF1 hücrelerinde, bal uygulanmayan HFF1 hücrelere göre Wnt genleri genel olarak artma eğilimindeyken β-katenin ifadesinde azalma gözlendi. Sonuçlar: Bal ön uygulamasının deri kök hücreleri genlerinin ifadesini arttırarak hücreleri UV kaynaklı yaşlanmadan koruyabildiği, kök hücre genlerinin ifadesinin artışıyla beraber hücre döngüsü genlerin ifadesinin azaldığı gözlenmiştir. Kök hücrenin kendini yenileme ve soya bağlı öncül hücreleri üretmeye yönelik Wnt sinyal ileti yolaklarında yer alan genlerin ifade değişimleri, bal varlığında UV hasarının etkilerinden korumaya yönelik hipotezimiz ile paralellik göstermektedir. Deri ix fibroblastlarında da bal uygulamasının UV hasar sonrası hücreleri koruyabildiği ve sağ kalımını destekleyebildiği yönünde veriler elde edilmiştir.